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發(fā)布時(shí)間： 2020-12-21 點(diǎn)擊次數(shù)： 2501次原代細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)：體外將動(dòng)物某組織，經(jīng)酶法或機(jī)械處理法分離成單細(xì)胞，并在合適的培養(yǎng)基中篩選出特定細(xì)胞，使得目的細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖。原代細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)的提取步驟：1、無(wú)菌：確保使用無(wú)菌設(shè)備、試劑和技術(shù)收集和處理組織。使用個(gè)人防護(hù)設(shè)備以避免污染。使用0.22微米的膜無(wú)菌過(guò)濾所有酶和試劑。2、切塊：用無(wú)菌剪刀或手術(shù)刀將組織標(biāo)本切成小塊(通:常為2x4mm)，然后將小塊放入選定的緩沖液、培養(yǎng)基或鹽溶液中。3、加酶：將組織清洗三次以消除多余的血液蛋白，然后加入您選擇的酶如膠原酶、蛋白酶、木瓜蛋白酶或胰蛋白酶。通常，約0.5 mg/ml~ 1.5mg/ml的酶。4、孵育：將組織樣本在其佳溫度下孵育，通常在37°C下孵育30~ 90分鐘。定期混合或輕輕搖動(dòng)標(biāo)本。5、洗滌：通過(guò)輕輕移液來(lái)分散細(xì)胞(也稱為研磨),然后，使用細(xì)網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞懸浮液。讓細(xì)胞沉淀并潷出多余的含液酶;洗兩到三次。含有FBS, BSA或其他抑制劑的洗滌溶液也可用于阻止酶消化。6、分析：將細(xì)胞重懸于正確的培養(yǎng)基或緩沖液中，然后定量測(cè)定細(xì)胞產(chǎn)量和活力。這是細(xì)胞分離過(guò)程中的重要步驟，因此您可以評(píng)估解離技術(shù)的結(jié)果。大多數(shù)研究人員使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定細(xì)胞產(chǎn)量,并使用臺(tái)盼藍(lán)重氮染料測(cè)量細(xì)胞活力。7、培養(yǎng)：這個(gè)適合，就可以根據(jù)所分離的細(xì)胞來(lái)選擇適臺(tái)研究的方案和處理步驟來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞了。
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